Все о здоровье печени на одном сайте

Разновидности и необходимость применения исследований методом ПЦР

Категория:
Просмотров: 140

Еще относительно недавно самыми расхожими анализами, которые назначались при всех болезнях были общие анализы мочи и крови, и даже биохимическое исследование являлось чем-то и ряда вон выходящим. Безусловно, эти анализы по-прежнему имеют первостепенное значение, и грамотный врач интерпретирует именно эти показания достаточно широко, так как разбирается во взаимосвязях всех процессов в организме и их проявлений в составе крови или мочи.

разновидности и необходимость применения исследований методом ПЦР

С течением времени нас перестала удивлять доступность анализов крови на гормоны, на антитела к паразитам или вполне себе рядовые уже процедуры по взятию биоматериалов на исследование в амбулаторных условиях. Дошла очередь и до ДНК, когда методика столь деликатного вмешательства в клеточную структуру стала входить в перечень услуг любой лаборатории. В данном материале поговорим о таком методе исследования, как ПЦР при гепатите С.

Вирус, вызывающий это заболевание, состоит из рибонуклеиновой кислоты. Его отличительной особенностью является способность к мутациям и модификациям. По этой причине вирус гепатита С неуловим иммунитетом. В современной медицине известно шесть генотипов вируса. При этом у каждого зафиксированы еще и десятки подвидов. В России распространены первый, второй и третий генотипы.

У большинства больных (примерно в 80% случаев) гепатит С перетекает в постоянную (хроническую) форму. Это приводит к осложнениям – таким, как фиброз печени – замене тканей органа нефункциональными рубцами. Фиброзная ткань становится причиной развития дальнейших осложнений – цирроза и онкологии. Вирус HCV передается от человека человеку, основной путь заражения - через кровь.

Пациент, у которого заподозрили гепатит, должен пройти два информативных анализа:

  1. Фиксация антител к конкретному возбудителю. Если на этом этапе они отсутствуют, то человек свободен от гепатита. Если наоборот, то назначается следующее обследование.
  2. Анализ методом ПЦР.

Поиск вируса вторым способом выявляет РНК возбудителя в крови через 10-12 дней с момента заражения. Это показательно иллюстрирует, что болезнь обосновывается в организме, в частности, в печени. Метод ПЦР является самым показательным, поскольку вирус иным способом на малом сроке распознать нельзя из-за отсутствия антител. Биохимия крови в случаях с поражением печени – не очень показательное исследование.

Важно!
Средство от болезней печени, которое помогло Читать далее →

Разновидности исследований методом ПЦР

Метод ПЦР имеет ряд преимуществ:

  • исследует конкретный участок дезоксирибонуклеиновой кислоты, что снижает риск ложно отрицательных результатов;
  • фиксирует сам вирус и даже его вид, а не продукты воздействия возбудителя на организм;
  • «видит» возбудителя даже при низкой вирусной нагрузке.

Анализ полимеразной цепной реакции подразделяют на качественный тип и количественный.

Первый констатирует факт наличия в организме возбудителя HCV. Обычно применяется к пациентам, у которых нашли антитела к гепатиту. Обнаружение РНК возбудителя свидетельствует об инфицировании пациента. Нормальным для здорового человека считается результат «Не обнаружено». Однако он также может говорить и о ничтожно малых концентрациях возбудителя, недоступных методу ПЦР.

Количественный анализ ПЦР призван определять вирусную нагрузку, назначается не всем больным и предназначен для следующих целей:

  • выявить рибонуклеиновую кислоту вируса и подтвердить диагноз «вирусный гепатит С»;
  • сделать предположение о течении недуга, а также о его переходе в хроническую стадию;
  • наблюдать за эффективностью терапии, применяя корректировку противовирусного лечения;

Количественный метод ПЦР показан в таких обстоятельствах:

  • при обнаружении антител по результатам качественного исследования;
  • при смешанных гепатитах;
  • при планировке противовирусного лечения;
  • в процессе терапии от гепатита С и после окончания лечения;
  • при остром гепатите С и его хронической форме.

разновидности исследования методом пцр

Подсчёт единиц возбудителя проводится в 1 мл или в 1 кубическом сантиметре крови, результаты выражаются в натуральных числах. Используется показатель международной единицы на миллилитр – МЕ/мл, что означает количество копий рибонуклеиновой кислоты на указанный объем. Высокий показатель анализа говорит о том, что заразиться от инфицированного будет легче.

Р-ДНК, branch-DNA – метод исследования разветвленной дезоксирибонуклеиновой кислоты. Наиболее простой и доступный анализ. Направлен на определение значительного количества копий вируса. Его резонансность невысока – от 500 МЕ/мл, поэтому есть вероятность не обнаружить вирус в крови.

Современный метод транскрипционной амплификации (ТМА) выявляет нуклеиновые кислоты, присутствующие в крови. Доступен по цене и высокочувствителен (5-10 МЕ/мл).

Расшифровка анализа на определение вирусной нагрузки происходит таким образом:

Значение количества вируса в числах Расшифровка результатов анализа
Не выявлено - Человек не болен гепатитом
- Порог чувствительности метода ниже количества вируса, либо вируса нет
<1,8*10^2 Концентрация вируса меньше охватываемого диапазона
<8*10^5 Вирус выявлен. Низкая нагрузка
>8*10^5 Вирус выявлен. Высокая нагрузка
>2,4*10^7 Вирус выявлен. Концентрация вируса выше охватываемого диапазона

Для каждой лаборатории применяются разные показатели, потому что у каждой – свои референсные значения. Но в среднем, на 1МЕ приходится 4 копии/мл.  На это стоит обратить внимание при расшифровке анализов во избежание получения неверного результата. Для этого нужно посмотреть, каким методом выполнялся анализ. Обычно это указывается в бланке с результатами исследования. Ниже представлена таблица условного перерасчета:

Метод Коэффициент перевода
Amplicor HCV Monitor v.2.0 (руч.) 0,9
HCV Monitor v2.0 (полуавт.) 2,7
Versant HCV RNA 3.0 5,2
LCx HCV RNA 3,8
SuperQuant 3,4

Применимость исследования виремии на различных этапах

Метод ПЦР назначается, когда в крови уже зафиксированы антитела к вирусу HCV. Результаты анализа нужны, чтобы адекватно оценить результативность проводимого или законченного лечения. Сравниваются показатели «до» и «после». Важно знать, что 25% пациентов, переболевших острой формой гепатита, выздоравливают самостоятельно, а вирус при этом не был обнаружен в их крови, когда они сдавали ее на исследование в лабораторию.

Внимание!
Для лечения и профилактики болезней печени наши читатели успешно используют метод Читать далее →

Анализ ПЦР предназначен для определения активного возбудителя инфекции. Результат может говорить о возможности передачи вируса от инфицированного. Эта информация необходима при наблюдении беременных пациенток, когда идёт речь о «вертикальном» пути передачи вируса.

Еще раз акцентируем, что именно диагностика методом полимеразной цепной реакции необходима для определения эффективности лечения. Чем выше показатель метода ПЦР, тем негативней прогноз для пациента.

Анализ во время противовирусной терапии назначается на 1, 4, 12 и 24 неделях. Вирологический ответ лечения происходит, если количество возбудителя не определяется ПЦР-методом.
Отсутствие снижения вирусной нагрузки через 12 недель говорит о безрезультатности лечения в конкретном случае. Уменьшение вирусов должно учитываться так: к примеру, с 1 000 000 МЕ падает до 100 000 МЕ.

После медикаментозной терапии анализ определяет факт рецидива. Отклонение от полученных результатов в большую сторону говорит о возвращении гепатита С.

На результат оказывают влияние некоторые условия. Самая вероятная причина ложного ответа – лабораторное упущение, нарушение условий при проведении исследования, а также во время подготовки к нему. Основания для пересдачи анализа имеют место при следующих нарушениях:

  1. Загрязнённый биоматериал.
  2. Присутствие в образце отпечатков гепарина.
  3. Наличие ингибиторов, оказывающих влияние на компоненты исследования ПЦР.

Для достоверности результатов рекомендуется проводить повторную диагностику в одной и той же лаборатории. Дело в том, что медицинские центры используют разные реактивы и иные особенности в исследованиях – это вполне нормально.

Стоит отметить, что метод ПЦР применим для окончательной диагностики только с другими обследованиями – анализами крови на биохимию, биопсией печени, фибросканированием (или эластометрия) и др. Также для эффективного лечения и положительного исхода нужно определить генотип вируса.

Полезное видео

1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Рейтинг 5.00 (1 Голос)